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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

GPNMB Others Human 人 GPNMB / Osteoactivin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) CASEIN酪蛋白*白色至淺黃色粉末COLDsigma

肌細(xì)胞分離液MDS3-基-1，1-二本基脲 99% 3-MqTHYL-1,1-DIPHqNYLURqc 13114-7-

OVAC細(xì)胞，人細(xì)胞 猴腎C細(xì)胞,M145細(xì)胞 視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)ERYTHROMYCIN紅霉素美國藥典級白色結(jié)晶粉末RTsigma

EB (NBL-4) (牛胚氣管細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2STETBUFFERSTET 緩沖液超級透明無混濁溶液RTsigma

HREpC Pellet 人類腎小管上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人心肌細(xì)胞cDNAHCM cDNA1951-3-6增效Piperonyl butoxide
組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml25-O-去乙酰基利福布汀25-O-Deacetyl Rifabutin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/chicken/ Yamaguchi/7/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) HDAC靶點(diǎn)抑制劑CUDC-101質(zhì)量規(guī)格：>98%

615小鼠T細(xì)胞性瘤株;L7912鹽酸洛美利嗪Lomerizine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO Hu 164 SCF 17 腹水瘤細(xì)胞,SAC-IIC3細(xì)胞 EMT6細(xì)胞，小鼠細(xì)胞酯蟾毒配基；蟾力蘇(標(biāo)準(zhǔn)品)Resibufogenin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

上皮細(xì)胞;MCF-10A蒲公英甾醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Taraxasterol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞;PIEC（標(biāo)準(zhǔn)品）Coumarin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

尿道上皮細(xì)胞(HUC)(5×105)茜素Alizarin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CL-0155ME-180(頸表皮癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2姜黃素Curcumin質(zhì)量規(guī)格：姜黃素類化合物>95%,姜黃素>75%,去甲氧基姜黃素<20%

非小細(xì)胞;NCI-H1975 大鼠視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL姜黃素（標(biāo)準(zhǔn)品）Curcumin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

b16 小鼠色素瘤細(xì)胞姜黃素（高）Curcumin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,BR
H9c2大鼠心肌細(xì)胞(ATCC來源) Rattus地奧司明Diosimin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥90%,BR

EFNA4 Others Mouse 小鼠 EFNA4 / Ephrin-A4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 地膚子皂苷Ic（標(biāo)準(zhǔn)品）Momordin Ic質(zhì)量規(guī)格：僅供鑒別用

人內(nèi)皮細(xì)胞HLEC地榆皂苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）Ziyuglycoside I質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CDH17 Others Rat 大鼠 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 地榆皂苷II（標(biāo)準(zhǔn)品）Ziyuglycoside II質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

鴨肝炎病毒1型RT-PCR試劑盒大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL丁香酚（標(biāo)準(zhǔn)品）Eugenol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品

本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。